软下疳需与下列疾病鉴别：①硬下疳：这是一期梅毒的表现。一般潜伏期2～3周，为坚硬无痛性溃疡，据此可区别。梅毒螺旋体暗视野及梅毒血清试验可进一步区分。但要注意两者的混合感染；②生殖器疱疹：此病为反复发作的集簇状分布的小水疱，破溃后形成的溃疡很浅，疼痛较轻，每次发作基本在同一部位。而软下疳溃疡一般较深，疼痛更剧烈；③性病性淋巴肉芽肿：此病表现为一侧或双侧腹股沟淋巴结肿大，触痛较轻，多在原发损害出现1～4周后发生，而此时原发损害多已消退。由于腹股沟韧带将肿大的淋巴结团块上下分开，两侧隆起中间凹陷，形成一长条沟槽，称为“沟槽征”，这是其特征性表现，可与软下疳鉴别。补体结合试验有助于进一步区分二者。